熒光定量PCR檢測

產(chǎn)品描述

周期報價(jià)

案例展示

▏ 服務(wù)原理及背景

實(shí)時(shí)熒光定量PCR在檢測體系中加入熒光基團，通過(guò)PCR 擴增反應中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實(shí)時(shí)檢測，從而實(shí)現對起始模板的定量及定性分析。隨著(zhù)PCR反應的不斷進(jìn)行，帶熒光的PCR產(chǎn)物逐步累積，信號強度等比例增強。這樣，我們可以通過(guò)熒光信號的變化來(lái)實(shí)時(shí)監控PCR產(chǎn)物量的變化，得到一條擴增曲線(xiàn)。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴增曲線(xiàn)有基線(xiàn)期、指數期和平臺期各階段。
基線(xiàn)期，熒光信號基本為背景信號，無(wú)法辨別產(chǎn)物的熒光信號值；
指數期，熒光信號超過(guò)背景信號進(jìn)入指數增長(cháng)階段的閾值，此時(shí)循環(huán)數稱(chēng)為 Ct ( Cycle threshold) 值，PCR模板起始濃度的對數值與Ct呈線(xiàn)性關(guān)系。
平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數級的增加，最終的 PCR產(chǎn)物量不能計算出起始模板拷貝數。

▏ 檢測方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強、快速高效的特點(diǎn)，廣泛應用于生物醫藥、臨床診斷、農業(yè)、環(huán)境科學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域，常用于檢測基因表達、基因變異、轉基因等。
定量方法包括絕對定量分析和相對定量分析，采用SYBR Green I法和Taqman探針?lè )ā?/span>
絕對定量分析：絕對定量法也稱(chēng)作標準曲線(xiàn)法，是一種利用已知的標準曲線(xiàn)來(lái)定量未知樣本目的模板起始量的方法。以 5-6 個(gè)點(diǎn)梯度稀釋所得的標準品（科佰可以提供大量驗證過(guò)的標準品）為模板，經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 擴增，以目的模板初始拷貝數的對數為橫坐標，檢測到的 CT 值為縱坐標繪制標準曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程，將未知樣本的 CT值帶入該方程即可計算出目的模板的起始量。
相對定量分析：相對定量可分析某一靶基因在不同樣品之間、同一樣品的不同部位之間以及某一樣品的某一部位在不同動(dòng)態(tài)時(shí)期之間的 mRNA 水平上表達量的比值，也可分析靶基因與內參基因在同一樣品中拷貝數的比值。